顆粒在線訊：多價疫苗中每種血清型的有效抗原含量是影響疫苗質(zhì)量的重要因素，以往檢測技術(shù)存在無法分型和同時定量檢測等問題。近日，中國科學(xué)院過程工程研究所生化工程國家重點實驗室研究員張松平、蘇志國團(tuán)隊利用毛細(xì)管區(qū)帶電泳（Capillary Zone Electrophoresis，CZE）技術(shù)，實現(xiàn)了對O/A雙價滅活口蹄疫病毒疫苗抗原（FMDV）中O型、A型完整病毒的同時定量檢測，作為單價和雙價FMDV疫苗質(zhì)量控制的簡單、快速、可靠的工具，具有重要應(yīng)用推廣價值。

　　張松平、蘇志國團(tuán)隊長期致力于復(fù)雜、超大生物分子的分離純化、穩(wěn)定與質(zhì)控新技術(shù)的基礎(chǔ)與應(yīng)用研究工作。近年來，針對FMDV這一獸用疫苗產(chǎn)品，基于完整病毒顆粒146S的顆粒特性，建立了高效液相凝膠過濾色譜（HPSEC）與多角度激光散射技術(shù)聯(lián)用檢測技術(shù)，實現(xiàn)了146S的定量、準(zhǔn)確、快速檢測（Vaccine，2015, 33: 1143–1150）。在此基礎(chǔ)上，研究人員研究和創(chuàng)建了系列抗失活純化技術(shù)、抗原穩(wěn)定關(guān)鍵技術(shù)和新型佐劑，在保證疫苗產(chǎn)品質(zhì)量、開發(fā)新工藝和新劑型方面發(fā)揮了重要作用。

　　用于區(qū)分血清型的ELISA、PCR等傳統(tǒng)技術(shù)，存在難以區(qū)分完整顆粒與亞病毒顆粒、裂解抗原，以及需要特定PCR引物的問題。HPSEC檢測技術(shù)同樣是基于樣品尺寸大小差異的分離技術(shù)。隨著多價FMDV疫苗的廣泛應(yīng)用，對于尺寸和分子量較為接近的不同血清型樣品（圖1），迫切需要一種能夠同時定量疫苗中不同血清型病毒抗原的準(zhǔn)確、簡便方法。

　　為此，在HPSEC檢測技術(shù)基礎(chǔ)上，該研究團(tuán)隊提出利用CZE對多價口蹄疫病毒疫苗抗原FMDV同時進(jìn)行O型、A型完整病毒的定量檢測。CZE的分離機(jī)制主要是在外加電場存在的情況下，基于不同組分的荷質(zhì)比差異進(jìn)行分離（圖2A），在病毒及病毒樣顆粒等大分子生物樣品分析檢測方面具有優(yōu)勢和應(yīng)用前景?；贑ZE的原理，研究人員首先通過對不同血清型FMDV的電荷分析，發(fā)現(xiàn)其存在較大的電荷差異（圖2B），具有采用CZE分離的理論基礎(chǔ)。在優(yōu)化的紫外檢測波長、背景電解質(zhì)、進(jìn)樣量和分離電壓等檢測條件下，A型和O型146S在15-400 μg/mL濃度范圍內(nèi)均表現(xiàn)出良好的重現(xiàn)性（RSD<5%）以及抗原含量對應(yīng)峰面積的線性響應(yīng)關(guān)系（R2=0.999）。利用不同血清型病毒粒子結(jié)構(gòu)差異所導(dǎo)致的CZE遷移時間差異，實現(xiàn)了A/O雙價146S的分離及定量，相對誤差<10%（圖3A）。與HPSEC方法相比，兩種方法所得病毒總量的結(jié)果一致，但CZE檢測不同血清型病毒具有不同的保留時間，從而可以分別定量檢測；而HPSEC法則無法區(qū)分尺寸相近的兩種病毒，因此只能得出總病毒含量（圖3B）。

　　CZE方法應(yīng)用于單價和A/O雙價FMDV商品疫苗的定量檢測，可以量化成品苗中每個血清型的FMDV含量，且不受核酸雜質(zhì)干擾。相關(guān)技術(shù)已申請國家發(fā)明專利。相關(guān)研究成果發(fā)表在Journal of Chromatography A上。

圖1.A型和O型FMDV的（A）電泳、（B）透射電鏡、（C）DLS粒徑分析、（D）HPSEC-MALLs分子量分析

圖2.（A）CZE原理；（B）不同濃度下A型和O型抗原的Zeta電位分析

圖3.（A）CZE及（B）HPSEC分別用于定量檢測A型和O型單價、以及A/O雙價FMDV