顆粒在線訊：隨著生物技術(shù)的進(jìn)步，納米抗體作為新一代抗體，因獨(dú)特性能在體外檢測(cè)、靶向治療領(lǐng)域備受關(guān)注。中國科學(xué)院青島生物能源與過程研究所蛋白質(zhì)材料研究組圍繞納米抗體，建立了完善的抗體篩選技術(shù)平臺(tái)，在利用納米抗體進(jìn)行體外檢測(cè)中相繼開發(fā)出多種技術(shù)手段。前期工作利用多聚化納米抗體開發(fā)的基于五聚納米抗體的免疫分析技術(shù)，在腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)中表現(xiàn)出優(yōu)越的敏感性和高特異性。

然而，納米抗體在固相載體上的物理吸附能力不足制約其在免疫分析中的廣泛應(yīng)用。近日，該研究組開發(fā)出聚苯乙烯表面納米抗體定向固定技術(shù)。相關(guān)研究成果發(fā)表在《分析化學(xué)》（Analytical Chemistry）上。

小分子蛋白或多肽因物理吸附能力差，通常無法直接固定于固相材料表面進(jìn)行測(cè)定分析。傳統(tǒng)方法是將小分子蛋白與載體蛋白或生物素進(jìn)行偶聯(lián)。這一過程使成本和工作量上升，對(duì)于表達(dá)量低下的蛋白質(zhì)更是挑戰(zhàn)。

針對(duì)上述問題，該研究利用全合成納米抗體文庫篩選獲得高親和力結(jié)合聚苯乙烯的納米抗體B2，且結(jié)合過程幾乎不受疏水作用和靜電作用的影響。研究通過分子對(duì)接和定點(diǎn)突變，揭示了納米抗體B2 CDR2環(huán)中的Trp51殘基與聚苯乙烯之間形成了關(guān)鍵的芳香氫鍵。為了探索B2在納米抗體定向固定化方面的潛力，研究將B2與在聚苯乙烯表面無法被動(dòng)吸附的癌胚胎抗原納米抗體11C12進(jìn)行融合表達(dá)，構(gòu)建了雙特異性納米抗體。這一融合蛋白在5分鐘內(nèi)便可直接從發(fā)酵液中實(shí)現(xiàn)在聚苯乙烯表面的有效定向固定化，并在化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫分析中表現(xiàn)出線性關(guān)系。

這一技術(shù)平臺(tái)具有如下特色：繞過繁瑣的蛋白質(zhì)純化、標(biāo)記等步驟，實(shí)現(xiàn)了從粗細(xì)胞提取物中直接高效、快速地固定目標(biāo)蛋白，并將處理時(shí)間從2.5天縮短至僅5分鐘；實(shí)現(xiàn)了目標(biāo)蛋白質(zhì)的定向固定，有助于保持蛋白活性和空間結(jié)構(gòu)的完整性；適用于表達(dá)水平極低的蛋白，保證了固定效果的高效性和可靠性。

該工作由青島能源所和中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院合作完成。研究工作得到山東省自然科學(xué)基金等的支持。

聚苯乙烯表面納米抗體定向固定技術(shù)