近日，中國(guó)科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所生物分離與界面分子機(jī)制創(chuàng)新特區(qū)研究組研究員卿光焱與中藥科學(xué)研究中心研究員梁鑫淼合作，在蛋白質(zhì)磷酸化研究方面取得新進(jìn)展，開發(fā)出一種智能聚合物功能化的仿生離子通道器件，實(shí)現(xiàn)了酪氨酸磷酸化的實(shí)時(shí)感知與測(cè)量，并在酪氨酸激酶抑制劑篩選中展現(xiàn)出較好的應(yīng)用潛力。

蛋白酪氨酸磷酸化是一種關(guān)鍵的細(xì)胞活動(dòng)調(diào)節(jié)機(jī)制，異常的酪氨酸磷酸化與多種癌癥的發(fā)生密切相關(guān)。近二十年，針對(duì)酪氨酸磷酸化相關(guān)激酶抑制劑藥物研究取得了長(zhǎng)足進(jìn)展，已成為相關(guān)癌癥治療的特效藥。在美國(guó)食品藥品監(jiān)督局批準(zhǔn)的40余種抗腫瘤藥物中，30多種是針對(duì)酪氨酸激酶的抑制劑。目前，在激酶抑制劑的篩選中，最常用手段是利用放射性同位素標(biāo)記的32P-γ-ATP作為底物，檢測(cè)磷酸化反應(yīng)產(chǎn)物的放射性，但該方法存在放射性污染、膜過(guò)濾操作時(shí)間較長(zhǎng)等問(wèn)題。另外，基于磷酸化特異性抗體的方法（例如酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法）也被用來(lái)檢測(cè)蛋白磷酸化，但因高昂的抗體成本以及繁瑣的清洗分離問(wèn)題，限制了其廣泛應(yīng)用。近年來(lái)，一些利用光學(xué)探針標(biāo)記底物的方法能夠?qū)崿F(xiàn)高靈敏的磷酸化檢測(cè)，卻受限于復(fù)雜的化學(xué)標(biāo)記過(guò)程。因此，尋找一種簡(jiǎn)單、高效、低成本、免標(biāo)記檢測(cè)酪氨酸磷酸化、適用于激酶抑制劑的篩選方法十分重要。

該團(tuán)隊(duì)通過(guò)模仿蛋白質(zhì)中精氨酸與酪氨酸磷酸鹽殘基的相互作用，設(shè)計(jì)了含多胍基的智能聚合物，并將其修飾到錐形納米孔道內(nèi)，制備出一種功能離子通道器件。研究發(fā)現(xiàn)，聚合物可以依托胍基識(shí)別磷酸化肽的磷酸化殘基，且能將這種分子層面的識(shí)別作用放大到聚合物構(gòu)象的變化上，并進(jìn)一步被轉(zhuǎn)換為通道離子電流的“OFF-ON”變化，實(shí)現(xiàn)對(duì)磷酸化肽的精確檢測(cè)。此外，當(dāng)引入鈣離子作為磷酸鹽的一個(gè)競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合成分時(shí)，該離子通道通過(guò)簡(jiǎn)單的納流控邏輯門運(yùn)算，即可大幅度提高對(duì)酪氨酸磷酸化肽檢測(cè)的選擇性。借助于對(duì)磷酸化肽的識(shí)別，該離子通道器件能夠用于實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)酪氨酸激酶催化下的酪氨酸磷酸化反應(yīng)，并且在監(jiān)測(cè)模型抑制劑對(duì)酪氨酸激酶活性的抑制實(shí)驗(yàn)中，該方法具有用于激酶抑制劑篩選的潛力。

相關(guān)成果發(fā)表在《美國(guó)化學(xué)會(huì)志》（J. Am. Chem. Soc.）上。以上工作得到國(guó)家自然科學(xué)基金、大連化物所創(chuàng)新特區(qū)組啟動(dòng)基金、興遼英才計(jì)劃等項(xiàng)目的支持。

大連化物所基于仿生離子通道開發(fā)出檢測(cè)酪氨酸磷酸化的新方法